Nationales Vorwort

Europäisches Vorwort

Einleitung

1Anwendungsbereich

2Normative Verweisungen

3Begriffe

3.1Aliquot

3.2Umgebungstemperatur

3.3Analyt

3.4Leistung einer analytischen Prüfung

3.5Blutentnahmesystem

3.6Blutentnahmeröhrchen

3.7Rückfließen

3.8zirkulierende TumorzellenCTCs

3.9CTC-Anreicherung

3.10CTC-Isolierung

3.11DNADesoxyribonukleinsäure

3.12Diagnose

3.13Untersuchunganalytische Prüfung

3.14Leistung einer UntersuchungLeistung einer analytischen Prüfunganalytische Leistung

3.15Hersteller eines UntersuchungstestsHersteller eines analytischen Tests

3.16Kanülenhalter

3.17präanalytische Prozessepräanalytische Phasepräanalytischer Arbeitsablauf

3.18PrimärprobeUntersuchungsmaterial

3.19Eignungsprüfung

3.20DNA-Eignungsprüfungsprogramm

3.21Raumtemperatur

3.22Probe

3.23Stabilität

3.24Lagerung

3.25Validierung

3.26Verifizierung

3.27Arbeitsablauf

4Allgemeine Betrachtungen

5Außerhalb des Labors

5.1Entnahme von Untersuchungsmaterial

5.1.1Informationen über den Spender/Patienten

5.1.2Wahl des Entnahmeröhrchens für venöses Vollblut durch das Labor

5.1.3Entnahme von venösen Vollblutproben bei Spendern/Patienten und Stabilisierungsverfahren

5.1.4Informationen zum Untersuchungsmaterial und Anforderungen an die Lagerung in der Blutentnahmeeinrichtung

5.1.4.1Allgemeines

5.1.4.2Verwendung von Blutentnahmeröhrchen mit Stabilisatoren

5.1.4.3Verwendung von Blutentnahmeröhrchen ohne Stabilisatoren

5.2Anforderungen an den Transport

5.2.1Allgemeines

5.2.2Verwendung von Blutentnahmeröhrchen mit Stabilisatoren

5.2.3Verwendung von Blutentnahmeröhrchen ohne Stabilisatoren

6Im Labor

6.1Eingang des Untersuchungsmaterials

6.2Anforderungen an die Lagerung von venösem Vollblut-Untersuchungsmaterial

6.3Anreicherung der CTCs

6.3.1Allgemeines

6.3.2Verwendung eines handelsüblichen CTC-Anreicherungssystems

6.3.3Verwendung laboreigener Protokolle zur CTC-Anreicherung

6.4Qualität der angereicherten CTCs

6.5Lagerung der angereicherten CTCs

6.6Isolierung der CTCs

6.6.1Allgemeines

6.6.2Verwendung eines handelsüblichen CTC-Isolierungssystems

6.6.3Verwendung eines laboreigenen CTC-Isolierungsverfahrens

6.7Verarbeitung der isolierten CTCs

6.8Isolierung der DNA aus der angereicherten CTC-Probe

6.8.1Allgemeines

6.8.2Verwendung eines handelsüblichen Kits für die DNA-Isolierung

6.8.3Verwendung eines laboreigenen DNA-Isolierungsverfahrens

6.9Quantitäts- und Qualitätsbewertung der aus angereicherten oder isolierten CTCs isolierten DNA

6.10Lagerung der aus angereicherten CTCs isolierten DNA

6.10.1Allgemeines

6.10.2Mit handelsüblichen Kits isolierte DNA

6.10.3Nach laboreigenen Protokollen isolierte DNA

Anhang ABeispiel eines kompletten Arbeitsablaufs für die molekulare Charakterisierung einzelner CTCs (informativ)

A.1Allgemeine Informationen zu durchgeführten Experimenten in Anhang A

A.2Präanalytischer Arbeitsablauf

A.2.1Zellkultur- und Aufstockungsexperimente

A.2.2Anreicherung und Auszählung der Zellen

A.2.3Einzelzellsortierung

A.3Analytische Untersuchung

A.3.1Genomamplifikation (WGA)

A.3.2Kontrolle der Qualität der WGA

A.3.3Sequenzierung der nächsten Generation

Anhang BEntscheidungsleitfaden für die kritischen Schritte des präanalytischen Arbeitsablaufs für die DNA-Isolierung aus CTCs (informativ)

Literaturhinweise (informativ)